纳米粒的制备分析（巩义予华DF-101S使用）

1  材料与方法 

1.1  试剂与仪器 

EGCG 原料药（98%，酷尔化学科技（北京）有限 公司），EGCG 对照品（98%，北京北方伟业计量技术 研究院商城分院，批号：060509），β-LG（纯度＞ 90%，上海源叶生物科技有限公司），（TritonX-100， 分析纯天津市恒兴化学试剂有限公司），甲醇（色谱 纯），磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰乙酸、磷酸等试剂 均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。 DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司），AL204 电子天平（梅特勒— 托利多仪器（上海）有限公司），DP1100 高效液相色 谱仪（大连依利特分析仪器有限公司），WH-2 微型 涡旋混合仪（上海沪西分析仪器厂），HZ-9211K 恒 温摇床（太仓华利达实验设备有限公司），激光粒度 分析仪（ZetaPALS 美国布克海文仪器公司），Sino Chrome ODS-BP 色 谱 柱（C18 柱，250mm×4.6mm， 5μm）。 

1.2  EGCG 含量测定方法的建立

色 谱 柱：C18 柱，5μm，4.6 mm×250 mm； 流动相：甲醇 - 水 - 乙酸（30 ∶ 68 ∶ 2）；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；检测波长 276nm；进样量 20μL。精 密 称 取 EGCG 对 照 品 25mg 于 25mL 容 量 瓶 中，配置为 1mg/mL 的 EGCG 母液，精密吸取 0.8mL、 1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、2.0mL EGCG 母 液 于 10mL 容量瓶中，配制一系列浓度的 EGCG 的对 照品溶液。以 EGCG 进样 浓度（mg/mL）为横坐标（X），峰面积（mV.sec）为 纵坐标（Y），绘制标准曲线（图 1），得回归方程为 Y=33232X-540.66，R2 =0.996。 结 果 表 明，EGCG 在 0.08~0.20 mg/mL 范围内线性关系良好。

1.3  EGCG-β-LG 纳米粒的制备 

用磷酸盐缓冲液配制一定浓度的 β-LG 溶液， 室温下在摇床（200r/min）中过夜，使其充分溶解。 用 pH 为 2.5 的磷酸盐缓冲液配制一定浓度的 EGCG 溶液。取 β-LG 溶液（9.5mL）水浴加热 20min，然后 加入 0.5mLEGCG 溶液，快速涡旋混合 20s，并马上置 于 25℃的水浴锅中，冷却 3h 即得。

2  结果与分析

用 pH 为 6.5 的磷酸盐缓冲液配制浓度为 3 mg/ mL 的 β-LG 溶液，室温下摇床（200 r/min）过夜，使 其充分溶解。用 pH 为 2.5 的磷酸盐缓冲液配制浓度 为 0.8 mg/mL 的 EGCG 溶液，现配现用。取 β-LG 溶 液（9.5 mL）在温度 75℃下水浴加热 20 min 然后加 入 0.5mL 浓度为 0.8 mg/mLEGCG 溶液，快速涡旋混 合 20s，并马上置于 25℃的水浴锅中，冷却 3h。即得 EGCG-β-LG 纳米粒。固 定 β-LG 的 浓 度 为 3mg/mL，EGCG 浓 度 为 0.8mg/mL，缓冲液 pH 为 6.5，测量不同热激温度下的 包封率。

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